藥品出現(xiàn)質(zhì)量問題，不僅關(guān)系著藥品生產(chǎn)企業(yè)健康經(jīng)營發(fā)展，對患者生命安全也有著直接影響。近些年來，由微生物污染引發(fā)的藥害事件高頻率發(fā)生。微生物污染源來自各個(gè)方面，若藥品生產(chǎn)期間殺菌消毒工作未到位，則會提升藥品被微生物污染的幾率。若患者使用被污染后的藥品，其生命安全將受到一定威脅?；诖?，文章就藥品無菌檢查中鑒定污染微生物展開研究。
 

　　藥品無菌檢查中污染微生物
 

　　鑒定必要性分析
 

　　無菌制劑用藥安全與前期藥品無菌檢查工作質(zhì)量有著十分密切關(guān)聯(lián)性，同時(shí)也直接影響著無菌制劑質(zhì)量評控水平以及臨床不良反應(yīng)情況的出現(xiàn)概率。通過對近些年來藥品無菌檢查實(shí)際情況的調(diào)研與分析，發(fā)現(xiàn)無菌藥害事件發(fā)生頻率逐漸提升。
 

　　但由于藥品質(zhì)量安全監(jiān)管各項(xiàng)工作精準(zhǔn)落實(shí)，使得無菌藥害事件所造成的負(fù)面影響并沒有擴(kuò)大，這其中藥品無菌檢查在此過程中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。無菌藥品污染主要來自三個(gè)方面，分別是物理性污染、化學(xué)性污染以及微生物污染。其中導(dǎo)致微生物污染問題出現(xiàn)的成因較多，微生物污染是指在各種因素綜合作用影響下，使得無菌藥品中微生物含量超過國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，繼而發(fā)生微生物污染情況。
 

　　微生物具有體積小、生長繁殖快、種類多以及適應(yīng)強(qiáng)等特征，這在一定程度上加大了藥品無菌檢查難度，同時(shí)對此方面工作提出嚴(yán)格要求。目前國家現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》相關(guān)條例對藥品中微生物有著明確規(guī)定，要求通過開展藥品無菌檢查工作，對微生物進(jìn)行監(jiān)管，盡可能消除對無菌制劑對用藥者生命安全的威脅。
 

　　從現(xiàn)階段我國臨床用藥情況來看，用藥頻率逐年呈上升趨勢，在一定程度上加大了藥品質(zhì)量安全監(jiān)管難度。為了充分發(fā)揮藥品無菌檢查功能作用，必須做好污染微生物鑒定工作并確認(rèn)藥品無菌檢查過程中是否會對藥品帶來污染影響。以明確微生物污染源，為進(jìn)一步優(yōu)化與完善優(yōu)化藥品無菌檢查提供有價(jià)值參考依據(jù)。
 

　　污染微生物鑒定實(shí)驗(yàn)
 

　　2.1.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
 

　　污染微生物鑒定的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備流程如下：
 

　　(1)實(shí)驗(yàn)研究對象：革蘭式陽性球菌，數(shù)量為 7 株；
 

　　(2)實(shí)驗(yàn)要求：分別在兩個(gè)無菌且獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件下開展污染微生物鑒定試驗(yàn)，根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)具體要求，配置相應(yīng)數(shù)量實(shí)驗(yàn)人員，要求參與實(shí)驗(yàn)的人員均要獨(dú)自完成鑒定無菌藥品的實(shí)驗(yàn)任務(wù)；
 

　　(3)基于國家現(xiàn)行《中華人民共和國藥典》規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，對產(chǎn)地、批次均不同的藥物進(jìn)行無菌檢查；改良馬丁培養(yǎng)基與硫乙醇酸鹽為培養(yǎng)基樣品，且存在處于生長狀態(tài)的微生物，培養(yǎng)時(shí)間設(shè)置為 24 h，環(huán)境溫度設(shè)置為 35 ℃，本次實(shí)驗(yàn)期間細(xì)菌總計(jì)收集 7 株；
 

　　(4)將 7 株細(xì)菌微生物作為本次污染微生物鑒定實(shí)驗(yàn)研究對象，通過一系列鑒定與分析，確定微生物污染源。
 

　　2.2.實(shí)驗(yàn)方法
 

　　本 次 鑒 定 細(xì) 菌 微 生 物 過 程 中，選 擇 細(xì) 菌 基 因組 DNA 提取試劑盒輔助實(shí)驗(yàn)人員提取微生物基因組 DNA，在提前準(zhǔn)備好的 TE 緩沖液中存放所提取的細(xì)菌 DNA。
 

　　為滿足藥品無菌檢查中污染物微生物鑒定要求，將選擇三種鑒定方法，分別是全自動微生物生化鑒定、16SrRNA 基因測序鑒定方法以及RiboPrinter 儀器鑒定，這三種鑒定方法主要負(fù)責(zé)細(xì)菌鑒定，其中 Ribo Printer 儀器分型法、16SrRNA 基因同源分型法以及 DiversiLab 儀器分型法用于分析各菌株同源性[1]。另外，為了保證本次鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，要求參與鑒定實(shí)驗(yàn)的人員均要具備較高專業(yè)水平和豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，確保細(xì)菌鑒定與分型實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范性、標(biāo)準(zhǔn)性，從而將微生物污染源如實(shí)反映。
 

　　2.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
 

　　2.3.1 細(xì)菌鑒定結(jié)果
 

　　本次鑒定實(shí)驗(yàn)共選擇 7 株 細(xì) 菌，其 中 全 自 動微生物化鑒定、16SrRNA 基因測序鑒定方法以及RiboPrinter 儀器鑒定三種方法所顯示的 6 株細(xì)菌鑒定結(jié)果信息一致，表皮葡萄球菌為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的細(xì)菌。經(jīng)過一系列鑒定操作，樣品鑒定結(jié)果呈陽性，分別是表皮葡萄球菌、沃氏葡萄球菌 ( 呈奶白色狀 )、溶血葡萄球菌。
 

　　2.3.2 細(xì)菌同源性鑒定結(jié)果
 

　　鑒定與分析細(xì)菌同源性的過程中，實(shí)驗(yàn)人員采用了多種鑒定法。采用 Ribo Printer 儀器對細(xì)菌分型后，發(fā)現(xiàn)溶血葡萄球菌分型無明顯變化特征，沃氏葡萄球菌與表皮葡萄球菌分別存在 2 種和 3 種結(jié)果。
 

　　采用 16SrRNA 基因同源分型，發(fā)現(xiàn)在基因水平方面，溶血葡萄球菌和沃氏葡萄球菌二者之間差異性變化較小，表皮葡萄球菌結(jié)果存在 2 種。通過對比此鑒定方法下細(xì)菌同源性結(jié)果，基于參照的 16SrRNA基因序列，發(fā)現(xiàn)結(jié)果信息顯示僅存在基因突變 1 個(gè)。
 

　　采用 DiversiLab 儀器分型，溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、沃氏葡萄球菌分別存在 2 組、3 組、2 組。通過分析葡萄球菌污染源，各實(shí)驗(yàn)樣品中并未出現(xiàn)細(xì)菌交叉污染情況，但其中一項(xiàng)樣品被沃氏葡萄球菌污染的幾率較高；因此環(huán)境因素并不是表皮葡萄球菌污染源，與自身因素有著十分密切的關(guān)聯(lián)性。
 

　　2.4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論
 

　　從藥品質(zhì)量安全監(jiān)管角度上分析，藥品無菌檢查工作有效性開展，不僅有利于促進(jìn)藥品質(zhì)量提升，在一定程度上也能起到減少臨床用藥階段誘發(fā)不良反應(yīng)情況出現(xiàn)，是實(shí)現(xiàn)藥品質(zhì)量安全監(jiān)管落實(shí)的必要途徑。通過對目前藥品無菌檢查情況調(diào)研與分析發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有污染微生物鑒定方法較為多樣，如全自動微生物生化鑒定方法、16SrRNA 基因測序鑒定方法等。其中生化鑒定法是現(xiàn)階段污染微生物鑒定過程中使用頻率較高的方法，但環(huán)境因素對此鑒定方法的使用效果有著較大影響，故該方法不適用于在過于復(fù)雜的環(huán)境中進(jìn)行污染微生物鑒定[2]。
 

　　基于此，本次藥品無菌檢查中選擇多種鑒定方法輔助實(shí)驗(yàn)開展。從整體上看，每項(xiàng)鑒定方法均獲得了較為精準(zhǔn)的結(jié)果，雖然各鑒定方法在操作方面各不相同，但其結(jié)果信息顯示均無明顯差異。通過對照上述幾種鑒定方法所顯示的結(jié)果信息，發(fā)現(xiàn) 6SrRNA 基因測序鑒定方法在分析菌株層面方面存在明顯劣勢，難以保證菌株層面分辨率。
 

　　因 RiboPrinter 儀器由高精密度構(gòu)件組成，在較高自動化水平支持下，使得鑒定結(jié)果相較于其他鑒定方法所提供的鑒定結(jié)果其結(jié)果準(zhǔn)確性、可靠性明顯高于后者。從藥品無菌檢查中微生物污染源追溯鑒定情況來看，溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、沃氏葡萄球菌均為諸多污染源中較為常見的幾種類型。
 

　　就本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：污染樣品的來源為溶血葡萄球菌，通過觀察各實(shí)驗(yàn)樣品，并未出現(xiàn)樣品間交叉污染情況；來源不同的沃氏葡萄球菌會對污染期間的樣品帶來一定程度上感染影響；上述提及表皮葡萄球菌來自所在環(huán)境，但環(huán)境因素并未對樣品造成污染。為了進(jìn)一步驗(yàn)證藥品檢查中污染微生物鑒定結(jié)果是否與實(shí)驗(yàn)過程中操作不規(guī)范相關(guān)，將采用 OOS( 超標(biāo)結(jié)果 )調(diào)查方法進(jìn)行驗(yàn)證，檢查藥品整個(gè)無菌檢查流程。
 

　　基于國家現(xiàn)行《中華人民共和國藥典》規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)與 GMP 要求，具體要求如下：
 

　　(1) 實(shí)驗(yàn)期間，所有參與實(shí)驗(yàn)鑒定的人員均具備相應(yīng)專業(yè)資質(zhì)，對藥品無菌檢驗(yàn)流程熟悉程度較高，各實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)均嚴(yán)格按照規(guī)范進(jìn)行操作；
 

　　(2) 實(shí)驗(yàn)全過程所涉及到的儀器設(shè)備各項(xiàng)參數(shù)設(shè)置均未出現(xiàn)誤差，問題，符合污染微生物鑒定實(shí)驗(yàn)要求標(biāo)準(zhǔn)；
 

　　(3) 實(shí)驗(yàn)期間所涉及到樣品、培養(yǎng)基、沖洗液等，在實(shí)驗(yàn)前期均做好相應(yīng)消毒殺菌工序，與無菌性實(shí)驗(yàn)結(jié)果信息顯示一致；
 

　　(4) 針對環(huán)境中微生物檢測，僅收集到表皮葡萄球菌，其他相關(guān)環(huán)境微生物并未發(fā)現(xiàn)[3]。從 OOS 調(diào)查結(jié)果來看，藥品無菌檢查中來自實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)期間污染的可能性。并加上多種鑒定方法反復(fù)對照實(shí)驗(yàn)，可以確定藥品無菌檢查中微生物污染和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境因素不相關(guān)，其中樣品運(yùn)輸或樣品加工環(huán)節(jié)受到污染的概率較高。因此，后期藥品無菌檢查過程中，相關(guān)人員應(yīng)多關(guān)注藥品加工及運(yùn)輸環(huán)節(jié)，提升對微生物污染控制重視程度，積極應(yīng)用手段，為藥品無菌檢查工作高效率開展提供強(qiáng)力技術(shù)支持，從根本上保障藥品質(zhì)量安全。
 

　　加強(qiáng)藥品無菌檢查中微生物
 

　　污染控制的有效建議
 

　　上述提及到藥品無菌檢查中微生物污染與實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不相關(guān)，但藥品加工及運(yùn)輸環(huán)節(jié)導(dǎo)致微生物污染問題發(fā)生的概率較高?；诖?，下面將著重闡述對這兩方面加強(qiáng)監(jiān)管的措施，減少微生物污染情況出現(xiàn)。
 

　　1人員方面
 

　　據(jù)數(shù)據(jù)顯示，由于人員操作方面因素導(dǎo)致無菌藥品中微生物含量超標(biāo)的概率最高，高達(dá) 70% 左右。為了進(jìn)一步加強(qiáng)對人員操作方面管控，應(yīng)根據(jù)國家現(xiàn)行規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，明確制定無菌操作流程，并要求進(jìn)入操作室的任何人員均要進(jìn)行全面消毒，并對無菌操作區(qū)內(nèi)的人員數(shù)量加以控制，一方面減少無菌操作區(qū)運(yùn)動頻率，規(guī)范人員操作行為，防止污染源出現(xiàn)；另一方面針對非加工人員進(jìn)入無菌操作區(qū)，如：參觀人員、設(shè)備維修人員以及質(zhì)檢人員等，均要在專業(yè)人員監(jiān)督與指導(dǎo)下進(jìn)入無菌操作區(qū)，待做好消毒程序后，方可進(jìn)入無菌操作區(qū)，降低此方面出現(xiàn)微生物污染可能性。
 

　　除此之外，無菌操作是降低微生物污染概率的必要途徑，若藥品生產(chǎn)人員無菌操作意識薄弱、無菌操作不規(guī)范以及個(gè)人消毒不等均會導(dǎo)致微生物污染情況出現(xiàn)。因此，必須提升藥品生產(chǎn)人員無菌操作規(guī)范性，增強(qiáng)無菌操作意識，在生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)嚴(yán)格按照規(guī)范流程進(jìn)行無菌操作，進(jìn)出無菌操作區(qū)均要消毒，切忌大幅度運(yùn)動，防止人員運(yùn)動帶來大量灰塵而導(dǎo)致微生物增多的情況出現(xiàn)。
 

　　2設(shè)施方面
 

　　為符合國家藥品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)的無菌藥品生產(chǎn)前提，需要保證藥品生產(chǎn)環(huán)境無菌。針對無菌環(huán)境設(shè)計(jì)，需要注意以下幾點(diǎn)內(nèi)容：
 

　　第一，嚴(yán)格區(qū)分無菌和有菌區(qū)域，藥品生產(chǎn)加工環(huán)節(jié)所涉及到滅菌設(shè)備均要按照規(guī)定要求并在區(qū)域內(nèi)存放和運(yùn)輸?？s短藥品生產(chǎn)運(yùn)輸路線，盡可能減少微生物出現(xiàn)。
 

　　第二，做好無菌環(huán)境消毒工作?；趪椰F(xiàn)行規(guī)定最新標(biāo)準(zhǔn)，選擇符合規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)的滅菌工藝，如甲醛熏蒸、乳酸熏蒸等，為了更好地保證藥品生產(chǎn)加工環(huán)境無菌性，應(yīng)根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)情況，明確消毒滅菌工藝，切實(shí)做到無菌化藥品生產(chǎn)和加工[4]。
 

　　第三，無菌設(shè)備選擇。以除菌過濾設(shè)備為例，為了保證藥液在過濾過程中無微生物污染情況出現(xiàn)，應(yīng)按照 GMP 規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，選擇合適的無菌過濾設(shè)備，在過濾設(shè)備中添加雙層除菌濾芯，以此來達(dá)到有效除菌目的，從根源上規(guī)避濾芯破損而出現(xiàn)微生物污染問題。
 

　　第四，藥品運(yùn)輸。全過程監(jiān)管藥品運(yùn)輸，有利于確保藥品質(zhì)量安全，并符合國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)際藥品運(yùn)輸過程中，應(yīng)遵循及時(shí)、準(zhǔn)確、安全以及規(guī)避微生物污染基本原則，嚴(yán)格按照現(xiàn)有藥品運(yùn)輸管理制度體系開展藥品運(yùn)輸各項(xiàng)工作。明確藥品運(yùn)輸人員、藥品質(zhì)量管理人員責(zé)任范疇，在藥品運(yùn)輸前期，根據(jù)藥品運(yùn)輸各項(xiàng)要求，做好運(yùn)輸路線規(guī)劃與運(yùn)輸工具確認(rèn)工作。避免藥品運(yùn)輸過程中出現(xiàn)不必要停留，有效縮短藥品運(yùn)輸耗時(shí)。并確認(rèn)所運(yùn)輸?shù)乃幤肥欠翊嬖诎b破損等情況，降低微生物污染概率。
 

　　除此之外，需要完善藥品運(yùn)輸防護(hù)措施，如：防水、防潮、防蟲等相關(guān)措施，以預(yù)防與控制微生物污染。如運(yùn)輸特殊性藥品，應(yīng)按照國家相關(guān)規(guī)定執(zhí)行藥品運(yùn)輸各流程，以提高藥品運(yùn)輸質(zhì)量為原則，根據(jù)季節(jié)變化采取相應(yīng)保暖與冷藏措施，規(guī)避運(yùn)輸環(huán)境因素導(dǎo)致微生物污染問題發(fā)生，切實(shí)做到全過程、監(jiān)管藥品加工與運(yùn)輸。
 

　　3結(jié)語
 

　　綜上所述，污染微生物鑒定作為藥品無菌檢查過程中最為關(guān)鍵一環(huán)，通過對其的研究以調(diào)研和分析目前藥品無菌檢查情況，其中為了保證鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性，采用了多種不同鑒定方法。結(jié)果顯示藥品被微生物污染，與環(huán)境因素?zé)o關(guān)，其中來自藥品加工或運(yùn)輸階段的污染源概率較大。因此，為了降低藥品被微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)對此方面管控，減少藥品使用不良反應(yīng)出現(xiàn)，從根本上保障藥品質(zhì)量。